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喜讯:全式金再获两项国内发明专利授权

发布时间:2019-09-24 15:13:29 点击次数:


 (一)“一种利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法及试剂盒”

            2019年08月13日,全式金获此项专利授权,专利号:ZL201610864592.0。


一种利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法及试剂盒


 本发明公开了一种利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法及试剂盒。首先提供了利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的试剂盒,包含:多个不同GC含量的标准品,文库稀释液,qPCR预混液,引物,ddH2O。还提供了利用上述试剂盒进行qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法。本发明试剂盒和方法定量精确、使用方便、适用范围广、选择性强、灵敏度高、特异性好、稳定性好,为高质量高效率的测序提供了保证。

 我公司应用此专利技术自主研发的定量试剂盒“TransNGS? Library Quantification Kit for Illumina (KQ101)” 特点:

 · 线性标准品,定量更精确。

 · 选择性强、定量更精确,精心设计多种不同GC 含量的标准品。

 · 特异性强,只扩增双端接头完整的文库分子。

 · 操作简便,直接使用预先稀释好的标准品,包含绝对定量所有必需组分。

 · 扩增效率与灵敏度高,特别优化的qPCR 体系与程序。

 · 适用范围广,可扩增AT/GC 含量高的模板。

 · 兼容性好,兼容所有主流qPCR 仪器。

 · 稳定性好,重复性好。

(1)产品稳定性

 分别使用不同批次产品进行qPCR 检测,结果显示,4 个批次的标准品(S6-S1) 的Ct 值均无明显差异,绘制的标准曲线方程非常稳定,标准品批次间稳定性非常好。


一种利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法及试剂盒


(2)与主流产品的对比

 分别使用TransGen、K 公司、N 公司及V 公司产品对6 个不同物种的文库进行定量,结果显示,TransGen 与K 公司对6 个文库定量结果无明显差异,而其它两种产品结果明显偏高或偏低,TransGen 产品定量结果与金标准K 公司产品定量结果一致。


一种利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法及试剂盒


(3)产品极限数据

分别使用TransGen 及K 公司产品对6 个差异明显的文库进行定量,结果显示,TransGen 对不同种属文库、不同GC含量、不同长度、不同浓度的文库都可以精确检测,与金标准K 公司一致,这说明产品适用范围广。文库检测合格后,按照文库定量结果将相同量的不同文库Pooling 至同一条Lane 后进行Illumina HiSeq 测序,数据分析显示,NGS 能获得预期量的clean reads, 并且根据TransGen 与K 公司定量结果所获得的数据量无明显差异。


一种利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法及试剂盒


 分别使用TransGen 与K 公司文库定量产品对5 种同一浓度的不同GC 含量(25%、37.5%、50%、62.5%、75%)的标准品进行qPCR 检测,结果显示,不同GC 含量的标准品的Ct 值差异小,都可很好地扩增。表明TransGen 产品适用范围广,与金标准K 公司产品相当。


一种利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法及试剂盒



(4)产品特色与优势

 · 精心设计5 种不同GC 含量的线性标准品,选择性更强,定量更精确。

 分别使用5 种不同GC 含量(25%、37.5%、50%、62.5%、75%)的标准品绘制标准曲线,定量天蓝色链霉菌(左,72%GC)与拟南芥(右,36% GC)这两个DNA 文库的浓度,结果显示,不同GC 含量标准品定量结果差异明显。如果以50% GC Standards 作为标准品,其定量结果明显会相对偏小(p 值都小于0.001,n=4)。因此,天蓝色链霉菌的DNA文库应该选择75% GC Standards 而拟南芥则选择37.5% GC Standards 分别作为其最佳标准品,文库定量结果会更加精确,确保获取更高质量的测序结果。


一种利用qPCR精确定量不同GC含量的二代测序文库的方法及试剂盒


 (二)“一种适用于高效反转录反应的反转录引物组合”

            2019年08月13日,全式金获此项专利授权,专利号:ZL201710031139.6。


一种适用于高效反转录反应的反转录引物组合


 本发明公开了一种适用于高效反转录反应的反转录引物组合,所述反转录引物组合由带有oligo(dT)结构的引物和半随机引物组成,还公开了所述反转录引物在反转录反应中的应用。本发明反转录引物组合在保留了锚定引物优势的同时,避免了普通随机引物所引起的碱基错配和非随机配对,消除传统反转录引物对于mRNA模板5’端、3’端的合成效率偏好性,使mRNA模板各位点能够均匀、无差错地合成到相对应的cDNA中,从而显著提升反转录效率与数据均一性、稳定性。

 除一步法外,Trans RT系列产品均配有Anchored Oligo(dT),结合位点铆钉,特异性高,跨越Poly(A)+结构,保证cDNA合成效率和成功率。

 在此我们要重点介绍一下我司的反转录All-in-One系列产品:

 1)TransScript? All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for PCR(AT321);

 2)TransScript? II All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for PCR(AH321);

 这两款产品含有反转录反应所需的全部试剂,只需加入模板RNARNase-free water即可反应。最大程度地简化了操作步骤, 降低了污染几率;反转录反应仅需30min;最佳Anchored Oligo(dT) PrimerRandom Primer(N9)配比,长链cDNA合成效率高;两款产品反转录产物适用于PCR(也可用于qPCR)。

 ·TransScript? All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for PCR合成长度,TransScript≤12kb;

 ·TransScript? II All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for PCR合成长度, TransScriptⅡ≤15kb;高热稳定性:反应温度42℃-55℃,最佳反应温度为50℃;适用于高拷贝、低拷贝基因检测;突出高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。

 3)TransScript? All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(One-Step gDNA Removal)(AT341);

 4)TransScript? II All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(One-Step gDNA Removal)(AH341)。

 这两款产品含有反转录反应所需的全部试剂,只需加入gDNA Remover,模板RNARNase free water即可反应。最大程度地简化了操作步骤, 降低了污染几率;整个反转录反应仅需15 min;由最佳的Anchored Oligo(dT) PrimerRandom Primer(N9)配比,及优化的SuperMix组成,确保对不同浓度的RNA有相同的反转录效率,短链cDNA合成效率高;该Mix中含有gDNA Remover组分,在同一反应管中,同时完成反转录与基因组DNA的去除,降低污染几率,保证后续qPCR实验结果更加理想。

 两项发明专利的同时授权既是我公司的荣誉,也是对我公司技术水平的肯定,全式金将继续坚持自主研发、创新的发展模式,为广大客户朋友们提供高性价比的产品,助力生命科学的研究和发展。


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